Procedimiento para la transformación de los cladodios de cactus Opuntia ficus-indica secos para producir bioetanol de segunda generación. La invención se basa en la aplicación de una serie de técnicas de pre-tratamiento mecánico, pre-tratamiento termoquímico ácido, sacarificación y fermentación alcohólica simultánea (SSF) y destilación, con el objetivo de extraer a la vez los azúcares fermentables de la matriz lignocelulósica de los cladodios de cactus y a continuación convertirlos a bioetanol de segunda generación. La invención permite la valorización de los cladodios de cactus Opuntia ficus-indica como un recurso de biomasa lignocelulósica no alimentaria, abundante y no explotada, para el desarrollo de biocombustibles de segunda generación como energía renovable y limpia, para afrontar el agotamiento notable de los recursos en energías fósiles.